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        凍存在-196℃液氮罐中的細胞復蘇方法

        時間:2020-06-18 09:58來源:未知 作者:班德液氮罐 點擊:
        細胞復蘇的原則-快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃,使細胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶,對細胞造成損害。

        一、 實驗前準備:

        1、將水浴鍋預熱至37℃

        2、用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。

        3、在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養瓶等等。

        二、取出凍存管:

        1、根據細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。

        2、從液氮罐中取出細胞盒,取出所需的細胞,同時核對管外的編號。

        三、迅速解凍:

        1、迅速將凍存管投入到已經預熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動,使管中的液體迅速融化。

        2、約1-2min后凍存管內液體完全溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺內。

        四、平衡離心:

        用架盤天平平衡后,放入離心機中3000r/min 離心3min

        五、制備細胞懸液:

        1、吸棄上清液。

        2、向離心管內加入10ml培養液,吹打制成細胞懸液。

        六、細胞計數:

        細胞濃度以5×105/ml為宜。

        七、培養細胞:

        將復合細胞計數要求的細胞懸液分裝入培養瓶內,將培養瓶放入37℃5%CO2的培養箱內2-4小時(或者24-48小時)后換液繼續培養培養,換液的時間由細胞情況而定。

        初學者易犯錯誤:

        1、水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃。

        2、水浴鍋內凍存管太多,導致傳熱不佳,使融化時間延長。

        3、離心前忘記平衡,導致離心機損壞和細胞丟失。

        4、一次復蘇細胞過多,忘記更換吸頭和吸管,導致細胞交叉污染。液氮罐

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