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        外周血單個核細胞分離及冷凍保存

        時間:2020-05-20 10:27來源:未知 作者:班德液氮罐 點擊:

        細胞分離:

        外周血用電動助吸器按照每管不多于35ml,平均分至50ml離心管中,931×g,離心8min,吸取上層血漿至50ml離心管中,取1.5ml于EP管中,標記,-80℃保存。NA稀釋血細胞,使得血細胞:NA為11,混勻后均勻緩慢地加至相應的A液上層,形成完整的界面。596×g,離心20min??梢娒黠@分層。吸棄第1層上清,小心輕柔地將第2層的白色細胞層分別吸至不同的潔凈50ml離心管中。分別向各管中加NA,稀釋混勻,定容至40ml/管。931×g,離心8min。吸棄上清,加NA重懸細胞。凍存處理前留取細胞懸液計數和活力測定。液氮罐

        細胞冷凍保存

        純化后細胞重懸于含終濃度9.8%的等體積DMSO2ml和右旋糖苷的冷凍保存液中,冷凍保護液配置成2組1組含80%的無血清培養液,另1組含80%自體血漿輕輕混勻后置-20℃冰箱冷卻平衡5-15min到4℃以下,同時把凍存管放4℃冰箱平衡15min。分裝入2ml凍存管內,每管1ml,管壁做好標識。放在樣本凍存盒,轉移至程序降溫盒儀器,最終將細胞保存于-196℃液氮內。液氮罐

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