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        外周血PBMNC分離及凍存

        時間:2020-05-20 10:26來源:未知 作者:班德液氮罐 點擊:

        PBMNC分離效果

        按照GMP生產規范和臨床ACI要求分離外周血PBMNC,冷凍保存前細胞活性為99.6%±0.4%n=5,與原始血樣比,PBMNC回收率58.4%±6.52%n=5。

        細菌和真菌培養陰性,實現全程無菌處理。液氮罐

        不同冷凍保護液對PBMNC的保護效果不同

        PBMNC在-196℃液氮中儲存24個月后復蘇,鏡下觀察見細胞形態完整,圓形飽滿,PBMNC復蘇效率89.7%±3.82%,凍存液中含80%無血清培養基組和含80%自體血漿組比較,無統計學差異P≥0.05)(1。

        PBMNC凍存后誘導

        AIL細胞的體外增殖及表型分析在倒置顯微鏡下觀察顯示,外周血單個核細胞呈懸浮生長,大小均勻,折光性一致,AIL經4d培養后部分細胞明顯增大,可見細胞集落,胞核密度加強,體積增大,胞膜光滑,未見突起,新鮮與凍存后的單個核細胞誘導的AIL在形態和表型上無明顯差別,增殖高峰期均在10-12d。

         

        在培養過程中第14天,凍存組AIL細胞所占相對百分率由約2.3%上升約為10.4%,細胞數增加約1048倍,對照組AIL所占相對百分率由約2.3%上升為約11.3%,細胞數增加約1105倍。兩組之間在細胞增長倍數與AIL所占百分比無顯著差異P>0.05。

        (表1)

        效應細胞的體外細胞毒活性

        新鮮的與凍存的單個核細胞誘導的AIL對NK敏感K562或非敏感株細胞HeLa及貼壁或懸浮生長的腫瘤細胞均顯示出很強的殺傷活性,且該活性隨效靶濃度比的增加而增大,兩組間的細胞毒活性無顯著性差異P>0.05)(2。液氮罐

        2比較各種冷凍和對照組之間的增殖和細胞表型。A:所有表型培養前。B:所有在冷凍組表型培養14 后。C:所有對照組表型培養14 后,D:所有增殖。E:自體免疫淋巴細胞。

        (表2

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