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        菌種保藏方法及注意事項

        時間:2020-05-19 09:11來源:未知 作者:班德液氮罐 點擊:
        農產品貯藏時一般都采用低溫貯藏法和化學藥劑處理法,但是很多熱帶、亞熱帶水果,如香蕉、芒果、荔枝等在低溫下容易出現冷害,不能采用低溫貯藏法進行保存,并且低溫貯藏成本高、耗能大、質量不穩定;化學藥劑處理能夠很好的實現果蔬采摘后的保鮮,但是化學試劑的殘留以及有毒殺菌劑的使用,給人們帶來的食品安全隱患問題,令人望而生畏。近10年來,生物保鮮成為國內外科研工作者研究的重點,利用微生物拮抗菌進行保鮮的產品已經陸續上市:Blossom-Protec;CandiFruit;Shemer;Bio-Save;MUSCODORTM等,影響微生物保鮮菌商業化生產的因素之一是:實際生產使用中,菌種的退化、在貯藏及惡劣環境中抗病能力下降。本文詳細綜述了微生物菌種的保藏方法,降低保鮮拮抗菌在生產、保藏過程中的變異及退化。液氮罐廠家

        1傳代保藏

        傳代保藏菌種是微生物保存中最常用的方法之一。很多微生物在低溫或者干燥處理時,會很快死亡,為了保存菌種的活性,就要定期不斷的進行菌種轉接、培養后再保存。我們所喝的酸奶就是采用這種方式進行生產菌種保存的。這種會產生酸性物質的菌種,在進行傳代培養時要在培養基中添加少量的碳酸鈣。傳代培養的過程中,培養的養分不要太豐富,培養溫度也要比孢子最適合的生長溫度略低。傳代培養保存微生物的方法簡單易行,只要培養皿就能實現,不需要特殊的設備,是目前實驗室各類微生物保藏最常用的方法。但是此法也存在著一些缺點,如培養基容易干枯;菌種管處經常被其他雜菌污染發生霉變;菌種在反復傳代的過程中發生基因突變,不能保證優良性狀傳遞下來;在傳代的過程中產生的孢子活性越來越弱。

        2液體石蠟覆蓋保藏

        為了傳代保存時,減少雜菌的侵染,使用液體石蠟進行覆蓋加以輔助,就是在斜面培養基上,當在最適合的培養條件下培養出健壯的菌體后,加入已滅菌的液體石蠟油,并將此斜面培養基保藏在低溫條件下。由于培養物表面覆蓋液體石蠟后可隔絕空氣,因此降低了微生物菌體的物質代謝,延緩細胞的衰老,同時也防止培養基水分蒸發,是一種簡易的菌種保藏方法。很多產生孢子能力低的絲狀菌都是采用這種方法進行保存。這種方法制作方法簡單,不需要經常移種傳代。對大多數種類的菌種保藏效果都比較理想。霉菌、放線菌、芽孢細菌可保藏2年以上,沒有芽孢的細菌都可以采用這種方法保藏1年左右,一些很難保藏的菌種如腦膜炎球菌,可以的采用這種方法保存至少3個月以上。但是采用石蠟覆蓋保藏法的菌種攜帶不方便,保存時需要大量空間,以保證培養基能直立放置。在取培養物進行移種時,一般要通過火焰灼燒將石蠟融化,這個過程可能造成培養物與石蠟油飛濺,有安全隱患。

        3冷凍干燥保藏

        冷凍干燥保藏法為菌種保藏方法中最有效的方法之一,對一般生活力強的微生物及其孢子以及無芽胞菌都適用。這種方法適用于菌種長期保存,一般可保存數年至十余年。因為冷凍干燥法使菌種處于一個無氧的真空環境中,微生物不能進行正常的新陳代謝,只能處于休眠狀態。當環境變為適合生長的適合,才會繼續增殖生長。所以保藏期就比較長。目前像春雷霉素、頭孢霉素、卡那霉素等抗生素菌種不易產生孢子的絲狀真菌,都是采用冷凍干燥法保存的。另外我國大多數生物制品菌種都是采用該法保藏。液氮罐廠家

        4液氮超低溫保藏

        液氮超低溫保藏法是菌種長期保藏的最有效最可靠的方法。液超低溫保藏法是把菌種裝在含有冷凍保護劑的安瓶瓶內,將該安瓶瓶放人液氮(-196℃)中保藏。由于菌絲體處于-196℃,其代謝降低到完全停止的狀態。甘油、血清蛋白、二甲基亞砜、聚乙烯氮戊環、糊精、吐溫80等可用做液氮低溫保藏法的保護劑,其中甘油在進入和游出細胞時速度非常緩慢,造成強烈的脫水,從而保護細胞,是目前最常用的保護劑。不同微生物要選擇不同的保護劑,再通過實驗加以確定保護劑的濃度,原則上是控制在不足以造成微生物致死的濃度,一般甘油為10%-20%、二甲基亞砜為5%-10%、聚乙烯氮戊環為0.4mmol/L。

        5蒸餾水保藏

        蒸餾水保藏菌種的方法普遍的應用于醫學微生物、食品微生物和工業微生物中,如皮膚癬菌、酵母、霉菌、放線菌的保藏,在食用菌金針菇的保藏中也有提到。其方法是:將菌體懸浮于蒸餾水中,即可在室溫下保存數年,此法應注意避免水分的蒸發。

        6結論

        綜上所述,傳代保藏法、液體石蠟覆蓋保藏、冷凍干燥保藏、液氮超低溫保藏、蒸餾水保藏等菌種保藏方法都各有各的優點,針對不同的拮抗菌的特點及保藏目的需要,選擇最好的保藏方法。目前,拮抗菌的保藏的最大問題是:如何保證在生產過程中菌種的穩定性,避免生產多代產品后菌種的退化及衰老,尤其是工業化生產的生物保鮮產品在貨架期間的貯藏。因此,利用拮抗菌保鮮的工廠化產品的貯藏,將是生物保鮮菌保藏研究的一個重要的部分。

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