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        影響精子保存效果的因素

        時間:2020-05-18 09:21來源:未知 作者:班德液氮罐 點擊:

        1.不同抗凍劑對櫛江珧和近江牡蠣精子保存效果的影響  液氮罐廠家

        用不同濃度的DMSO和甘油作為保護劑冷凍精子,解凍激活后檢測精子活率。其中,櫛江珧冷凍后直接鏡檢精子活率最高的是8%DMSO處理組,為60.2%;曙紅Y染色結果與鏡檢結果相吻合,即8%DMSO處理組精子活率最高,為55.6%(圖1A)。而近江牡蠣冷凍后鏡檢精子活率最高的是10%DMSO處理組(66.0%);曙紅Y染色結果亦顯示10%DMSO保護效果最好,為60.9%(圖1B)。

        2.不同降溫程序對櫛江珧和近江牡蠣精子保存效果的影響  液氮罐廠家

        用終濃度8%和10%的DMSO分別作為櫛江珧和近江牡蠣的保護劑,檢測A、B、C、D4種不同的降溫程序的保護效果。如圖2所示,降溫程序A對精子的保護效果較差,櫛江珧和牡蠣的精子活率分別為26.1%和32.8%(直接鏡檢);采用降溫程序B處理,櫛江珧和牡蠣精子的活率明顯上升至46.5%和55.6%(直接鏡檢);按照降溫程序C進行降溫后精子的活率最高,櫛江珧達到60.2%(直接鏡檢)和55.6%(曙紅Y染色),牡蠣達到66.0%(直接鏡檢)或60.9%(曙紅Y染色);而降溫程序D,即直接津入液氮法的保護效果最差,精子活率接近0。

        3.精液稀釋方式不同對櫛江珧和近江牡蠣精子保存效果的影響

        DMSO對精子存在一定的毒性,DMSO濃度過高或者作用時間過長都會增加對精子的損傷。DMSO分子滲透進入精子的時間約為30min,在這段時間內采取逐級升高DMSO濃度的方式稀釋精液,以減少DMSO的毒性。結果見圖3,將抗凍液等分為3份,依次與精子混合的稀釋方案對精子的保護效果最好,櫛江珧鏡檢和曙紅Y染色的精子活率分別達到了63.0%和60.9%,近江牡蠣鏡檢和曙紅Y染色的精子活率分別達到了66.1%和61.8%。

        4.不同平衡時間對櫛江珧和近江牡蠣精子保存效果的影響

        檢測不同平衡時間對冷凍效果的影響,如圖4所示,櫛江珧和近江牡蠣精液在不經4℃平衡時保存效果都最差,櫛江珧精子鏡檢和曙紅Y染色檢測活率分別為39.0%和34.5%,近江牡蠣為42.0%和36.7%。櫛江珧在平衡時間為15min時保存效果最好,鏡檢和曙紅Y染色檢測活率分別為60.5%和54.9%,近江牡蠣在平衡時間為20min時保存效果最好,鏡檢和曙紅Y染色檢測活率分別為64.5%和60.0%。利用SPSS軟件中的單因素方差法(analy-sisofvariance,ANOVA)分析發現,櫛江珧和近江牡蠣平衡15、20和25min的3個樣本復蘇后精子活率沒有統計學差異(P>0.05),因此4℃平衡15~25min都有利于精子的冷凍保存。

        5.不同樣品體積對櫛江珧和近江牡蠣精子保存效果的影響

        不同保存體積對冷凍效果存在明顯的影響,如圖5所示。當樣品體積為0.2mL時,櫛江珧和近江牡蠣精子保存效果都是最差的,低至27.8%和31.7%(鏡檢)。櫛江珧精子活率最高的是1mL體積組,鏡檢和曙紅Y染色分別為60.0%和53.5%;近江牡蠣精子活率最高的也是1mL體積組,鏡檢和曙紅Y染色分別為63.0%和57.1%。1.4mL體積組櫛江珧和近江牡蠣精子的活率也較高,直接鏡檢櫛江珧和近江牡蠣精子活率約為56.3%和60.5%,且與1.0mL體積組相比無統計學差異(P>0.05)。

        6.不同保存時間對櫛江珧和近江牡蠣精子復蘇效果的影響

        對同一批樣品,分別在冷凍不同天數后解凍復蘇統計精子活率。如圖6所示,冷凍精子與鮮精凍0d)相比精子活率明顯降低,從90%降至60%左右。其中冷凍0.5、1、7和30d組樣品間精子活率并無顯著差異(P>0.05);冷凍180d樣品組的精子活率略低于0.5、1、7和30d組樣品(P<0.05)。


         

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